کیت سنجش HCG (titration) به روش الایزا | نام |
تعیین کمی غلظت HCG (titration) به روش الایزا در سرم انسان | نام کامل کیت |
Fertility ELISA kits | نام دسته |
96 | تعداد تست |
Sandwich ELISA | اساس آزمایش |
IU/L 10000-0 | محدوده شناسایی |
lµ 20 نمونه سرم | نمونه |
IU/L 10 | حساسیت |
حدود 30 دقیقه | مدت زمان آزمایش |
12 ماه از تاریخ تولید | عمر مفید |
hCG جهت سنجش هورمون hCG در سرم انسان طراحی و ساخته شده است
مواد موجود در کیت
1. پلیت پوشانده شده با آنتی بادی منوکلونال Anti-hCG: (1 پلیت، 96 چاهک).
2. معرف کونژوگه آنزیمی (2 ویال، ml 12)
3. assay buffer: دو ویال 12 میلی لیتری آماده مصرف
4. استانداردها: 0, 50, 250, 1000, 2500, 5000, 10000 IU/L در بافر حاوی نگهدارنده (6 ویال، 1.5میلی لیتری)
5. بافر شستشوی غلیظ: PBS-Tween (1 ویال 30 میلی لیتری،20X)
6. محلول سوبسترا- رنگزا: پروکسید هیدروژن و تترا متیل بنزدین (TMB). (1 ویال 12 میلی لیتری)
7. محلول توقف: اسید کلریدریک یک مولار (1 ویال،6 میلی لیتر).
8. سرم کنترل: hCG در سرم به همراه نگهدارنده (2 ویال،1.5 میلی لیتر).
موادی که در کیت وجود ندارند:
1. میکروپیپتهای دقیق
2. آب مقطر
3. دستگاه الایزا ریدر دارای فیلتر 450 نانومتری و در صورت امکان 630 نانومتری بعنوان فیلتر رفرانس.
4. کاغذ جاذب رطوبت
مقدمه:
هورمون گنادوتروپین جفتی انسان (hCG) گلیکوپروتئینی با وزن مولکولی 38000 دالتون است که توسط سلول های تروفوبلاست جفت در دوران بارداری سنتز می شود. hCG متشکل از دو زیرواحدآلفا و بتا میباشد. زیرواحد آلفا hCG مشابه زیرواحد آلفا هورمون های LH، FSH و HCG انسانی است و زیرواحد بتا مسوول اثرات هورمونی اختصاصی مولکول hCG می باشد. بواسطه شباهت های ساختمانی، خصوصیات فیزیولوژیک و ایمونولوژیک hCG تقریبا مشابه هورمون LH است. hCG دارای اثرات لوتئوتروپیک بوده و شکل گیری جسم زرد را حمایت می کند. hCG همچنین عملکرد هورمونی بیضه و غده آدرنال جنین را تعیین می کند. hCG سرم در مراحل اولیه حاملگی ظاهر شده، غلظت آن تدریجاً افزایش مییابد به طوریکه در سه ماهه اول به اوج خود میرسد سپس بصورت پیشرونده تا زمان زایمان کاهش مییابد. بنابراین اندازه گیری hCG خصوصاً در سه ماهه اول یک اقدام مهم برای پایش حاملگی است. علاوه بر تشخیص زودهنگام بارداری، اندازه گیری hCG همچنین در تشخیص بارداری های غیر طبیعی اهمیت دارد. در بارداری خارج رحمی نسبت به بارداری طبیعی سرعت افزایش hCG آهسته تر بوده و در سطوح پایین تری باقی می ماند. غلظت بالای hCG عموما در بارداری چند قلویی و در بیماران با تومورهای تروفوبلاست و غیر تروفوبلاست نظیر بیضه، پستان، کارسینوما برونشیال و سلول های رویانی مشاهده می شود.
اساس آزمایش:
اساس آزمون هورمون HCG ،ایمونوانزیمومتری است.
در این تست الایزا،کیت به روش ساندویچی وبا استفاده ازسنجش ایمونولوژیکی آنزیم تهیه شده است .
HCG موجود در نمونه ها به عنوان آنتی ژن به دو آنتی بادی زوج اختصاصی منوکلونال خود متصل میشود.یکی از آنتی بادی ها بر روی فاز جامد و دیگری به آنزیم HRP متصل شده است.
پس از اضافه شدن نمونه سرم بیمارها مولکول HCG با آنتی بادی های منوکلونال واکنش داده و بین آنتی بادی متصل به فاز جامد و آنتی بادی کنژوکه شده با آنزیم ساندویچ می گردد.
پس ازگذشت زمان انکوباسیون چاهک ها تخلیه داده شده و شستشو می گردد.سپس به هر چاهک سوبسترای آنزیم اضافه میگردد.استانداردها با غلظت مشخص با نمونه مجهول آزمایش می شوند، که بر اساس منحنی استانداردجذب نور در مقابل غلظت HCG ، غلظت نمونه های مجهول بدست می آید.
فعالیت آنزیم با غلظت HCG در نمونه ها رابطه مستقیم دارد.